Стъпка 1: Разтворете суровия пептид Melanotan I в 100 mL пречистена вода и филтрирайте сместа през 0,45 μm мембрана, за да получите разтвор на суров пептид.
Стъпка 2: Пречистете суровия пептид меланотан I с помощта на високо-течна хроматография (HPLC). Използвайте колона с динамична аксиална компресия DAC-HB50 с процес на градиентно елуиране, използвайки мобилна фаза А (0,05 тегл.% трифлуорооцетна киселина във вода) и мобилна фаза Б (0,05 тегл.% трифлуорооцетна киселина в ацетонитрил). Наблюдавайте пробата с помощта на UV детектор и събирайте пептидния разтвор, съответстващ на целевия пик във фракции.
Етап 3: След HPLC пречистване, получете 180 mL разтвор на Melanotan I трифлуороацетат с чистота над 99%; концентрирайте това чрез ротационно изпаряване, за да получите 50 mL от разтвора.
Step 4: Equilibrate the chromatography column with deionized water and load the sample (50 mL of the Melanotan I trifluoroacetate solution with >99% чистота). Елуира се в продължение на 50 минути, като се използва система от 2% воден разтвор на оцетна киселина. Концентрирайте събрания целеви продукт до 80 mL чрез ротационно изпаряване, след което го подложете на процеси на пред-лиофилизация и лиофилизация. Накрая, получете 5,33 g пептид Melanotan I с висока{9}}чистота, представляващ добив от 32,33%.